產(chǎn)品名稱

名稱    小鼠三叉神經(jīng)元細胞

2.組織來源：三叉神經(jīng)組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠三叉神經(jīng)元細胞分離自三叉神經(jīng)組織；三叉神經(jīng)為最粗大的混合性腦神經(jīng)，含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運動核，纖維組成三叉神經(jīng)運動根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內(nèi)側(cè)，最后進入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中，經(jīng)卵圓孔出顱，隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運動根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維，主要傳導咀嚼肌的本體感覺。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主，這些纖維的細胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)（半月節(jié)）內(nèi)，該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成，其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦，止于三叉神經(jīng)諸感覺核，其中傳導痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核；傳導觸覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細胞的周圍突組成三叉神經(jīng)三大分支，即第1支眼神經(jīng)、第2支上頜神經(jīng)、第3支為下頜神經(jīng)。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內(nèi)、口腔、鼻腔、鼻旁竇的粘膜、牙、腦膜等，傳導痛、溫、觸等多種感覺。

5.方法簡介：

實驗室分離的小鼠三叉神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

實驗室分離的小鼠三叉神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M317

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣

傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

產(chǎn)品特點:

1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。

2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前，應(yīng)觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì)，例如是否有雜細胞或者支原體等。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存，勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。

4. 冷凍保存的細胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細胞濃度不要太高，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。

4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6，依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 ％ DMSO，若是不確定細胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時，亦應(yīng)作一個backup culture，以防止冷凍失敗。

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。