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產(chǎn)品中心

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小鼠表皮角化細胞

產(chǎn)品簡介

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重組逆轉錄病毒穩(wěn)態(tài)表達細胞篩選試劑盒 10次
(HAT+潮) (10毫升:10倍濃縮)

產(chǎn)品廠地:上海市
更新時間:2025-02-20
廠商性質:經(jīng)銷商
訪問量:259
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品牌其他品牌貨號GOY-01X1193
規(guī)格5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶供貨周期現(xiàn)貨
主要用途產(chǎn)品僅供科研使用應用領域化工

實驗要點及說明:

1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;

5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產(chǎn)品屬性:  

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

小鼠表皮角化細胞

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

GOY-01X1193

商品介紹:

名稱    小鼠表皮角化細胞  

2.組織來源:皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介:

小鼠表皮角化細胞分離自皮膚組織;表皮位于動物皮膚的外層,由胚胎時期外胚層形成,具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構,由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層,即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。表皮角化細胞(KC)是構成表皮的主要細胞成分,在體內處于不斷增殖過程中,分裂的角化細胞主要位于其基底層,少數(shù)位于棘細胞層。隨著向表層的推移,細胞的分化程度逐漸增加,并喪失分裂活性。

5.方法簡介:

實驗室分離的小鼠表皮角化細胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的小鼠表皮角化細胞經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

包被條件鼠尾膠原2-5μg/cm2

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin

產(chǎn)品貨號CM-M168

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO25%

冷凍保存細胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

88.jpg

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 CA XII 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

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