冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：   

商品介紹：

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 PAH / PH (415 Asn/Asp) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 VDR / NR1I1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 KIT / c-KIT / CD117 (aa 540-972) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 HER2 / ErbB2 / CD340 (676-1255) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 PON3 / Paraoxonase 3 (50 Ser/Asn) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

 NELL2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

小鼠 Notch-1 / NOTCH1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)

小鼠牙齦上皮細(xì)胞氧化釔 99.99% metals basis亞鈰八水 99.9% metals basisHuman Protein Carbonyl,PC ELISA Kit   人羰基化蛋白

氧化釔 40nm 球形，99.5%亞鈰八水 99.999% metals basishuman phospho-inhibitory subunit of NF-κB Alpha,pIKB Alpha ELISA kit  人化核因子κB抑制蛋白α（IKKα human ELISA kit）

氧化釔 99.99% metals basis ,50nm環(huán)十二酮 99%Human paxillin,Pax ELISA Kit  人樁蛋白

二氧化鋯 AR,99.0%環(huán)十二碳三烯 98%Human small breast epithelial mucin,SBEM ELISA Kit  人小表皮粘蛋白

二氧化鋯 99.99% metals basis,50nm2-氯乙基苯硫 98%human Mus musculus similar to 60S ribosomal protein L12,LOC382344 ELISA kit   人類似60S核糖體蛋白L21

納米氧化鋅 99.9% metals basis，30±10nm1-苯基-炔 97%human orosomucoid 2,ORM2 ELISA Kit  人類粘蛋白2

納米氧化鋅 99.8% metals basis，90±10nm12-冠-4 98%human MAX dimerization protein 1,mxd1 ELISA Kit  人MAX二聚化蛋白1

納米氧化鋅 99.8% metals basis，50±10nm環(huán)戊 99.9%,含50ppm BHT 抑制劑human claudin 14,CLDN14 ELISA Kit  人水閘蛋白14