產品屬性： 

商品介紹：

冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豚鼠白介素5(IL-5)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

豬神經特異性烯醇化(NSE)免疫試劑盒進口、分裝

大鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)免疫試劑盒進口、組裝

羊白介素7(IL7)免疫試劑盒*直銷

大鼠腺病毒(ADV)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷

大鼠3-羥基-3-甲基戊二酰輔A合(HMGCS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

大鼠17羥孕酮(17-OHP)免疫試劑盒進口、組裝

魚白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒進口、組裝

大鼠肺表面活性物質相關蛋白B(SP-B)免疫試劑盒進口、組裝

大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)免疫試劑盒*直銷

YAC-1 (小鼠淋巴瘤細胞)1瓶 KB細胞株 KB 低溫運輸和保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH7.0   Tris-HCl Buffer,1.0M,pH7.0   常溫保存

1mg 重組蛋白A/G Recombinant Protein A/G -20℃保存

2 ug pWHM3 pWHM3 低溫運輸，-20℃保存

50次 柱式軟體動物DNAout Column Mollusk DNAOUT 常溫

2 ug pECFP-Mito pECFP-Mito 低溫運輸，-20℃保存

ITC肉湯 ITC Broth 250g