?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。

SNU-475 細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

SNU-475細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持SNU-475細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 SNU-475細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于SNU-475細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                 445 mL

特級(jí)胎牛血清                                                50 mL

 運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA pcr檢測(cè)試劑盒

Human heat shock protein 90 (HSP-90) ELISA Kit 人熱休克蛋白90(HSP-90)試劑盒

HumanCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

humanangiotensinⅡreceptoypeⅠa,AgⅠa試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型(AgⅠa)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物高內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10次

Humanβ-subunitsofhemoglobin,HB-βELISAKit人血紅蛋白β亞基(HB-β)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠抗胰島細(xì)胞抗體(ICA)試劑盒 ，英文名： ICA ELISA Kit

Mouse mucin / mucin 5AC (MUC5AC) ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)試劑盒

RatiactParathormone,i-PTHELISAKit 大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

CLIAKitforFS(MouseFollistatin)ELISAKit小鼠卵泡抑素

細(xì)胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性熒光定量試劑盒20次

Ratplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠孤兒受體配體   英文名稱：   Mouse Aemin   英文縮寫：   A

小鼠α葡萄糖苷酶   英文名稱：   Mouse α Glucosidase   英文縮寫：   AG

小鼠雄激素   英文名稱：   Mouse Androgen   英文縮寫：   ADG

?；趸?/span>   英文名稱：   Mouse Acyl-CoA oxidase   英文縮寫：   ACO

癌胚抗原單克隆抗體

磷酸化組胺受體H1抗體

EPHA4重組大鼠 EphA4 蛋白 Protein

GLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12 0.5mgGLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12

STXBP3重組人 STXBP3 / UNC-18C 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

DYDC2 Protein Human 重組人 DYDC2 / DPY30 domain containing 2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

SRC Protein Mouse 重組小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His &?

SNU-475 細(xì)胞專用培養(yǎng)基GLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12 0.5mgGLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12

DYDC2 Protein Human 重組人 DYDC2 / DPY30 domain containing 2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

EPHA4重組大鼠 EphA4 蛋白 Protein

SRC Protein Mouse 重組小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

STXBP3重組人 STXBP3 / UNC-18C 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein