細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

人原代膽囊動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持人原代膽囊動脈內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代膽囊動脈內(nèi)皮細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代膽囊動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CD36L1/SRB1 peptide 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原 0.5mgCD36L1/SRB1 peptide 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原

BNIP3L Protein Human 重組人 BNIP3L 蛋白

FZD1重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

APCS Protein Mouse 重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

F3重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白  Protein

大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)試劑盒 ，英文名： BMPR-1A ELISA Kit

Rabbit ierleukin 10 (IL-10) ELISA Kit 兔子白介素10(IL-10)試劑盒

日本血吸蟲(SJ)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMKK6(Humanmitogenactivatedproteinkinasekinase6)ELISAKit人原活化蛋白激酶激酶6

體液脊髓過氧化酶(MPO)活性比色法定量試劑盒20次

ELISAKitFSH犬促卵泡素

轉(zhuǎn)基因植物Bt基因核酸試劑盒   48T

轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因核酸試劑盒   48T

轉(zhuǎn)基因植物cry1A基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

豬氧化酶(XOD)試劑盒

Human keratinocyte aocrine factor (KAF) ELISA Kit / amphiregulin (AR) ELISA Kit 人角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)試劑盒/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒

Porcinephospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit 豬0酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlphaNAG(HumanAlphaN-acetylglucosaminidase)ELISAKit人αN已酰氨基葡糖苷酶

血液結(jié)構(gòu)型內(nèi)皮細(xì)胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量試劑盒20次

PlaHumanVitaminC,VCELISAKit植物C(VC)試劑盒

17號染色體開放閱讀框82抗體

脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體

人原代膽囊動脈內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基FZD1重組小鼠 Frizzled-1 / FZD1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CD36L1/SRB1 peptide 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原 0.5mgCD36L1/SRB1 peptide 高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗原

F3重組人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白  Protein

BNIP3L Protein Human 重組人 BNIP3L 蛋白

APCS Protein Mouse 重組小鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。