細胞實驗步驟：

一、細胞復蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風30min；

2.預熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻，并做好標記；

13.在顯微鏡下觀察復蘇的細胞密度及狀態(tài)；

14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

人原代心臟微血管周細胞胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持人原代心臟微血管周細胞最佳的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代心臟微血管周細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代心臟微血管周細胞的培養(yǎng)。

注意事項：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule 0.5mgEpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮細胞粘附分子/表皮細胞粘附分子抗原

CALML3 Protein Human 重組人 CALML3 蛋白 (His 標簽)

HGF重組大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 Protein

LTA4H Protein Mouse 重組小鼠 Leukotriene A4 Hydrolase / LTA4H 蛋白 (His 標簽)

IL23重組人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)試劑盒 ，英文名： CBS ELISA Kit

Rabbit collagen type III (Col III) ELISA Kit 兔子Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)試劑盒

百日咳桿菌(BP)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-2/GelatinaseAELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)免疫捕獲試劑盒20次

ELISAKitPSA犬前列腺特異性抗原

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5   英文名稱：   human Insulin like Growth Factor Binding Protein 5   規(guī)格：      英文縮寫：   IGFBP5

胰島素   英文名稱：   Human Insulin   規(guī)格：      英文縮寫：   INS

細胞間粘附分子1   英文名稱：   Human Iercellular Adhesion Molecule 1   規(guī)格：      英文縮寫：   ICAM-1

干擾素α受體   英文名稱：   Human Ierferon α Receptor   規(guī)格：      英文縮寫：   IFNαR

鴨主要組織相容性復合體(MHC)ELISA 試劑盒

Human ai prothrombin aibody (aPT1/aPT2) ELISA Kit 人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)試劑盒

HumanInsulieceptorβ,ISR-βELISAKIT 人胰島素受體β(ISR-β)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforACV-A(MouseActivinA)ELISAKit小鼠活化素A

血液組織蛋白酶L(CATHEPSINL)活性熒光定量試劑盒20次

MouseProgesterone,PROGELISAKit小鼠孕激素/孕同(PROG)試劑盒

α-(1,3)-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶 4

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1抗體

人原代心臟微血管周細胞專用培養(yǎng)基HGF重組大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 Protein

EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule 0.5mgEpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮細胞粘附分子/表皮細胞粘附分子抗原

IL23重組人 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

CALML3 Protein Human 重組人 CALML3 蛋白 (His 標簽)

LTA4H Protein Mouse 重組小鼠 Leukotriene A4 Hydrolase / LTA4H 蛋白 (His 標簽)

細胞培養(yǎng)步驟：

?細胞復蘇?：

從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細胞傳代?：

當細胞長到80%~90%時，進行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當細胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補加新鮮培養(yǎng)基。

做好標記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細胞進行凍存。

將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。

將細胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。