細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

兔原代破骨細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持兔原代破骨細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含兔原代破骨細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于兔原代破骨細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Cx32(Connexin-32 0.5mgCx32(Connexin-32) 間隙連接蛋白32抗原

CNTN4 Protein Human 重組人 Contactin 4 / CNTN4 蛋白

IL22RA2重組大鼠 IL22BP / L22RA2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

TNF Protein Mouse 重組小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

CA7重組人 Carbonic Anhydrase VII / CA7 蛋白 Protein

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)試劑盒 ，英文名： MMP7 ELISA Kit

Mouse ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)試劑盒

RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFABP(Humanfattyacid-bindingprotein)ELISAKit人脂肪酸結(jié)合蛋白

細(xì)胞堿性焦0酸酶(AlkalinePyrophosphatase)活性比色法定量試劑盒20次

RatMyosin,MYSELISAKit大鼠肌球蛋白(MYS)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)試劑盒   96T/48T

小鼠去甲上腺素（NE）試劑盒   96T/48T

小鼠去甲上腺素(NA)試劑盒   96T/48T

小鼠趨化因子(FK)試劑盒   96T/48T

小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human immunoglobulin like anscripts receptor (ILTsR/LIR/CD85) ELISA Kit 樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)試劑盒

HumanClaracellprotein,CC16ELISAKit 人克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

FishThyroxine,T4試劑盒魚類甲狀腺素(T4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母(AMYLASE)總活性熒光定量試劑盒20次

MouseCompleme3,C3ELISAKit小鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

ATP-依賴的RNA解旋酶3抗體

溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族30成員7抗體

兔原代破骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基IL22RA2重組大鼠 IL22BP / L22RA2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

Cx32(Connexin-32 0.5mgCx32(Connexin-32) 間隙連接蛋白32抗原

CA7重組人 Carbonic Anhydrase VII / CA7 蛋白 Protein

CNTN4 Protein Human 重組人 Contactin 4 / CNTN4 蛋白

TNF Protein Mouse 重組小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。