細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

小鼠原代肌腱干細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代肌腱干細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代肌腱干細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于小鼠原代肌腱干細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1 0.5mgB7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽)

IGFBP6 Protein Human 重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白

CEACAM1重組小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白 Protein

F3 Protein Rat 重組大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白

CSF1R重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 標(biāo)簽) Protein

大鼠跨膜蛋白27(TMEM27)試劑盒 ，英文名： TMEM27 ELISA Kit

Monkey macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit巨噬細(xì)胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒

Ratdopamine,DAELISAKit 大鼠多巴胺(DA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFT4游離T4

細(xì)胞花生四烯酸(arachidonicacid)酶反應(yīng)比色法定量試劑盒20次

Ratplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISAKit大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)試劑盒規(guī)格：96T/48T

四甲基化銨   100g

TMA   500g

四甲基胺   5g

TMB   1g

豚鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human aconitase 2 (ACO-2) ELISA Kit 人烏頭酸酶2(ACO-2)試劑盒

HumanNoradrenalineBitaas,NE-BELISAKit 人重去甲(NE-B)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumancrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,X試劑盒人Ⅰ型膠原N末端肽(X)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織DNA損傷彗星熒光試劑盒20次

HumanProstaglandinF2α，PGF2αELISAKit人前列腺素F2α(PGF2α)試劑盒規(guī)格：96T/48T

Toll樣受體銜接蛋白TICAM2抗體

磷酸化雷帕靶蛋白抗體

小鼠原代肌腱干細(xì)胞專用培養(yǎng)基CEACAM1重組小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白 Protein

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1 0.5mgB7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽)

CSF1R重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 標(biāo)簽) Protein

IGFBP6 Protein Human 重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白

F3 Protein Rat 重組大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。