豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒方法使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品：
豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標儀：用于微量樣品比色分析
儲存條件：
14℃或－20℃
準備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

硬脂酸鉀分子式：322.57分子量： C18H36O2·K英文名稱：Potassium stearateCAS號：593-29-3

3,5-二-1,2,4-三氮唑分子式：99.09分子量： C2H5N5英文名稱：3,5- two -1,2,4- threeCAS號：1455-77-2

3-氯-5-三氟甲吡分子式：181.54分子量： C6H3ClF3N英文名稱：3- -5- threeCAS號：85148-26-1

鹽酸分子式：68.51分子量： ClH5N2英文名稱：Hydrazine hydrochlorideCAS號：2644-70-4

4,6-二氯-5-甲嘧分子式：163分子量： C5H4Cl2N2英文名稱：4,6- two -5-CAS號：4316-97-6

3,5-二叔丁溴分子式：269.22分子量： C14H21Br英文名稱：3,5- tert butyl bromobenzeneCAS號：22385-77-9

辛酸硬酯酰分子式：368.64分子量： C24H48O2英文名稱：Hard acid esterCAS號：59130-69-7

鹽酸左咪唑分子式：240.75分子量： C11H12N2S·HCl英文名稱：鹽酸左咪唑CAS號：16595-80-5

2-溴-6-吡分子式：234.09分子量： C11H8BrN英文名稱：2- -6- phenyl pyridineCAS號：39774-26-0

1-溴-3-(二氟甲氧)分子式：223.02分子量： C7H5BrF2O英文名稱：1- -3- (two f) benzeneCAS號：262587-05-3

右旋四氫巴馬汀英文名稱：Right hand four MartinCAS號：3520-14-7分子式：355.42分子量： C21H25NO4

豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒方法Mammaglobin A  乳腺珠蛋白1抗體 0.1ml

HLA Class 1 ABC/HLAabc  人類白細胞抗原A抗體 0.1ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/RBITC  羅丹明標記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml

phospho-TNIK(Ser764)  磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 0.1ml

Collagen X  Ⅹ型膠原抗體 0.1ml

POC5  細胞中心粒蛋白抗體 0.2ml

CACH6/Cav2.3  L型鈣通道蛋白a1亞型6抗體 0.2ml

DRAK1/STK17A  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶17A抗體（DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激酶1） 0.2ml

SERPING1/C1 Inactivator  酯酶抑制蛋白C1IN抗體 0.2ml

GSTA3  谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A3抗體 0.1ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的兔抗猴IgG 0.1ml

Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的羊抗牛IgG 0.1ml

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。