腸道病毒EV71核酸檢測(cè)試劑盒方法使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
腸道病毒EV71核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                   1份

燈盞花乙素英文名稱(chēng)：Flower BCAS號(hào)：27740-01-8分子式：462.37分子量：C21H18O12

匹多莫德英文名稱(chēng)：Pi do MaudeCAS號(hào)：121808-62-6分子式：244.27分子量： C9H12N2O4S

氟洛芬英文名稱(chēng)：FluparoxanCAS號(hào)：76639-94-6分子式：358.21分子量： C12H14Cl2FNO4S

醋胺硝唑分子式：187.18分子量： C5H5N3O3S英文名稱(chēng)：Ammonium acetateCAS號(hào)：140-40-9

1-氟-3--5-硝分子式：267分子量： C6H3FINO2英文名稱(chēng)：1- -5- -3-CAS號(hào)：3819-88-3

N-乙-N-(2-羥-3-磺丙)-3-鈉鹽(TOOS)英文名稱(chēng)：N- ethyl -3- (2- hydroxy -3-) -N- methyl aniline sodium (TOOS)CAS號(hào)：82692-93-1分子式：331.4分子量： C12H18NNaO4S·2H2O

阿那曲唑分子式：293.37分子量： C17H19N5英文名稱(chēng)：阿那曲唑CAS號(hào)：120511-73-1

鄰三聯(lián)分子式：230.3分子量： C18H14英文名稱(chēng)：Adjacent threeCAS號(hào)：84-15-1

圣草次苷英文名稱(chēng)：Time of StCAS號(hào)：13463-28-0分子式：596.53398分子量：C27H32O15

2,4-二氟甲分子式：128.12分子量： C7H6F2英文名稱(chēng)：2,4- two fCAS號(hào)：452-76-6

1,4,7,10-四叔丁二萘嵌分子式：476.73分子量： C36H44英文名稱(chēng)：1,4,7,10- tert butyl two ryleneCAS號(hào)：677275-33-1

腸道病毒EV71核酸檢測(cè)試劑盒方法ICAM4/CD242  細(xì)胞間粘附分子4抗體 0.2ml

Bik  促凋亡Bik蛋白抗體 0.1ml

KCNN4  鈣激活鉀通道蛋白4抗體 0.1ml

APP/ABPP  淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml

SEPT10  細(xì)胞分化蛋白SEPT10抗體 0.2ml

phospho-Akt(Thr308)  磷酸化蛋白激酶B抗體 0.1ml

NDUFS4  線粒體復(fù)合物NDUFS4蛋白抗體 0.2ml

IL-18/IGIF  白細(xì)胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子抗體 0.1ml

MCC  大腸癌腫瘤突變蛋白抗體 0.2ml

UPP1/Uridine Phosphorylase 1  尿嘧啶核苷磷酸化酶1抗體 0.2ml

FBXO24  FBXO24蛋白抗體 0.2ml

Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2  0.1ml

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。