反應(yīng)五要素：

動(dòng)物源性成分(18S)核酸檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度：15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：

引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100mg左右的植物種子（約1/4黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1mL溶液A 中，95℃保溫10-15分鐘，加入0.1mL溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：

1、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；

3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

普通PCR反應(yīng)流程:

自備物品：

15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器

比色皿：用于比色的容器

96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析

儲(chǔ)存條件：14℃或-20℃

準(zhǔn)備物品

清理液（A）毫升
染色液（t B）微升
稀釋液（C）毫升
溶解液（tD）毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份

3--4-羥吡水合物分子式：110.11分子量： C5H6N2O英文名稱(chēng)：3- amino -4- hydroxy pyridine hydrateCAS號(hào)：6320-39-4

新綠原英文名稱(chēng)：Neochlorogenic acidCAS號(hào)：906-33-2分子式：354.31分子量：C16H18O9

1,1-羰二(2-甲咪唑)分子式：190.2分子量： C9H10N4O英文名稱(chēng)：1,1- carbonyl two (2-)CAS號(hào)：13551-83-2

羥吳茱萸堿英文名稱(chēng)：HydroxyevodiamineCAS號(hào)：1238-43-3分子式：319.35718分子量：C19H17N3O2

甲硅油英文名稱(chēng)：Methyl silicone oilCAS號(hào)：分子式：分子量：

伏蟲(chóng)隆英文名稱(chēng)：Volt wormCAS號(hào)：83121-18-0分子式：381.1分子量： C14H6CL2F4N2O2

N-七氟丁酰咪唑分子式：264.1分子量： C7H3F7N2O英文名稱(chēng)：N- seven fCAS號(hào)：32477-35-3

貝萼皂苷元英文名稱(chēng)：Shell sepal saponinCAS號(hào)：6989-24-8分子式：488.7分子量：C30H48O5

(R)-2-(α-甲芐)-5-硝吡分子式：243.27分子量： C13H13N3O2英文名稱(chēng)：(R) -2- (alpha methyl benzyl group) -5-CAS號(hào)：64138-65-4

姬姆氏色素英文名稱(chēng)：Ji MuCAS號(hào)：51811-82-6分子式：291.8分子量： C14H14ClN3S

鉍試劑II英文名稱(chēng)：Bismuth reagent IICAS號(hào)：6336-51-2分子式：264.43分子量： C8H5KN2S3

P53 protein(wt-p53)  腫瘤抑制基因P53蛋白抗體（野生型P53） 0.1ml

HN protein  雞新城疫血凝素－神經(jīng)氨酸酶抗體 1ml

GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基受體α3抗體 0.2ml

C17orf74  17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框74抗體 0.2ml

Visfatin-1(CT)  內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體) 0.1ml

IQCA1  IQCA1蛋白抗體 0.2ml

RAB21  G蛋白家族RAB21蛋白抗體 0.2ml

KLHL26  Kelch樣蛋白26抗體 0.2ml

phospho-p38 MAPK/MAPK14(Thr180/Tyr182)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體 0.1ml

M2-PK/PKM2  酸激酶-M2抗體 0.1ml

Anterior Gradient 2  前梯度同源蛋白2抗體 0.1ml

TM4SF3  跨膜蛋白4超家族成員3抗體 0.2ml