NADP磷酸酶(NADPase)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
商品屬性：

測定意義：

測定原理：

NADPase 能夠催化 NADP+水解為 NAD+和無機(jī)磷的反應(yīng)，通過測定無機(jī)磷的量來測定 NADPase 活性。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15 mL×1 瓶， 4℃保存。

試劑二：粉劑×4 支，-20℃保存；用時加入 1 mL 試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。

試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。

試劑五：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑六：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑六 20 倍稀釋，即取 0.5mL 試劑六加 9.5 蒸餾水，充分混勻。

定磷試劑的配制：按 H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色，若無色則試劑失效，若污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

樣本的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。810min，取上清，置冰上待測。

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨。(庫存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo)。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。

2、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）

37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確反應(yīng) 30min 后，95℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，10000g5min，取上清

3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）

注意事項：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格，要沒有一點(diǎn)磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液，干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測成

2、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管和對照管只要做一次即可。

NADPase 酶活性計算：

1、按組織蛋白濃度計算：

定義：每小時每毫克組織蛋白 NADPase 分解 NADP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個 NADPase 活力單位。

NADPase (μmol/h/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(V 樣×Cpr)÷T=5×(A 測定管-A 對A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算：

定義：每小時每 g 組織 NADPase 分解 NADP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個 NADPase 活力單位。

NADPase (μmol/h /g 鮮重)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=5×(A

管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷WC 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V 總：酶促反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：加入樣本體積

V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，0.5 小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度mg/mL；W：樣本鮮重，g。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

嚴(yán)格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作，避免誤用或浪費(fèi)。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。

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