正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

商品屬性：

測(cè)定意義：

NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?；w進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
測(cè)定原理：
NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH；NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT），通過(guò)在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度（吸光值的變化）可反映出NADK活性的大小。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1 瓶，-20 ℃保存；

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

組織樣本的前處理：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑一和試劑二 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 15min 以上。

3、工作液Ⅰ的配制：在試劑三中加入 5mL 試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

 工作液Ⅱ的配制：在試劑四中加入 18mL 試劑二，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后

-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

4、加樣表

試劑名稱(μL) 測(cè)定孔 對(duì)照管

樣本 20 20

工作液Ⅰ 80

試劑一 80

充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 15min，立即煮沸2min（蓋緊，防止水分散失）冰浴冷卻，10000g，25℃離心 10min，取上清

上清液 40 40

工作液Ⅱ 160 160

加完試劑混勻，室溫靜置 15min，340nm 下測(cè)定吸光值，ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

NADK 活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）NADK 活力的計(jì)算:

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=53.59×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADK 活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=53.59×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min /104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.107×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm；d：

比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應(yīng)時(shí)間，15 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞

總數(shù)，500 萬(wàn)。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）NADK 活力的計(jì)算:

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=107.18×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADK 活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=107.18×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=107.18×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADK（nmol/min /104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.214×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103

L / mol /cm；d：

96 孔板光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應(yīng)時(shí)間，15 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞

總數(shù)，500 萬(wàn)。

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明：

一、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測(cè)、總抗氧化能力（TAC）檢測(cè)、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類黃酮含量檢測(cè)、植物總酚（TP）含量檢測(cè)試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法，用于測(cè)定各種樣品中的XO活性，特點(diǎn)是測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測(cè)范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過(guò)氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過(guò)氧化氫（H2O2）檢測(cè)、脂質(zhì)過(guò)氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細(xì)胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長(zhǎng)。

三、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)、過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例，提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過(guò)WST-8法測(cè)定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見(jiàn)干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測(cè)范圍：3.13- 200U/mL。

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